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BOUZABATA Sara DJAMAA Fouzia Thème : Influence des Métaux lourds sur la croissa

BOUZABATA Sara DJAMAA Fouzia Thème : Influence des Métaux lourds sur la croissance des souches bactériennes isolées à partir des nodules de Vicia faba et Pisum sativum Nature du diplôme : Master en Ecologie microbienne Résumé : Cette étude consiste à mettre en évidence l’effet des métaux lourds sur les bactéries nodulant les légumineuses isolées à partir des nodules de Pisum sativum (le pois) et Vicia faba (la féve). L’étude phénotypique des souches porte sur les caractères morphologiques et culturaux, la recherche d’enzymes spécifiques, la résistance intrinsèque aux métaux lourds aux concentrations choisies ainsi que la mesure de croissance en milieu liquide en présence de différentes concentrations des métaux lourds. Les résultats obtenus font ressortir la résistance et la sensibilité des souches vis-à-vis des métaux lourds. Mots clés : Pisum sativum, Vicia faba, Métaux lourds. Laboratoire de recherche : Laboratoire d’écologie microbienne, Faculté des Sciences de la Nature et de Vie. Université des Frères Mentouri Constantine Directeur de Recherche : Mr. A. BENGUEDOUAR Professeur à l’université des Frères Mentouri Constantine. Membres du jury : Président : Mr. M.A. HAMIDECHI Professeur à l’université des Frères Mentouri Constantine. Examinateurs : Mme. R. ALATOU Maitre de conférences à l’université des Frères Mentouri Constantine. ﻟﺟﻣﮭورﯾﺔ اﻟﺟزاﺋرﯾﺔ اﻟدﯾﻣﻘراطﯾﺔ اﻟﺷﻌﺑﯾﺔ ا RÉPUBLIQUE ALGÉRIENNE DÉMOCRATIQUE ET POPULAIRE و زا رة اﻟﺗﻌﻠﯾم اﻟﻌﺎﻟﻲ و اﻟﺑﺣ ث اﻟﻌﻠﻣﻲ MINISTÈRE DE L’ENSEIGNEMENT SUPÉRIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE Université des Frères Mentouri Constantine Faculté des Sciences de la Nature et de la Vie ﺟﺎﻣﻌﺔ اﻻﺧ وة ﻣﻧﺗ و ر ي ﻗﺳﻧطﯾﻧﺔ ﻛﻠﯾﺔ ﻋﺎ وم اﻟطﺑﯾﻌﺔ و اﻟﺣﯾﺎة Département : Microbiologie Mémoire présenté en vue de l’obtention du Diplôme de Master Domaine : Sciences de la Nature et de la Vie Filière : Sciences Biologiques Spécialité : Ecologie Microbienne Thème Membres de jury : Président du jury : M.A. Hamidechi Prof. Univ. Frères Mentouri- Constantine. Rapporteur : A. Benguedouar Prof. Univ. Frères Mentouri- Constantine. Examinateur : R. Alatou M .C. Univ. Frères Mentouri- Constantine. Année Universitaire 2014 - 2015 Influence des Métaux lourds sur la croissance des souches bactériennes isolées à partir des nodules de Vicia faba et Pisum sativum Présenté et soutenu par : BOUZABATA Sara Le : 15/06/2015 DJAMAA Fouzia Le : 15 /06/2015 à 11H REMERCIEMENTS Nous exprimons tout d’abord, nos profonds remerciements à DIEU tout puissant, qui nous a guidé sur le droit chemin et nous a donné le courage et la volonté de finir ce mémoire. Au terme de ce travail, nous tenons à exprimer toute notre profonde gratitude et nos remerciements à Monsieur BENGUEDOUAR Ammar, Professeur au Département de Microbiologie, Université Frères Mentouri- Constantine pour avoir accepté la responsabilité de diriger ce travail, pour ses conseils avisés et pour ses encouragements, ainsi sa patience. Nous tenons à exprimer notre grande considération et nos profonds remerciements aux membres de jury qui nous ont fait l'honneur de juger notre travail. En particulier à Monsieur Le Professeur HAMIDECHI. Mohamed Abdelhafid. pour avoir accepté de présider le jury de ce mémoire. et à Madame. ALATOU Radia pour nous avoir fait l’honneur d’examiner ce travail. Nos sentiments de reconnaissance et nos remerciements vont également à l’ensemble de nos enseignants qui ont contribué à notre formation tout au long de notre parcours pédagogique, que ce soit en Licence ou en Master. Dédicace A mes très chers parents pour toutes les privations et sacrifices. A mes chères sœurs Hassina, Saliha, et Yasmina. A mes chères frères Lyes,Allawa, Ammar, Brahim, et Ismail. A mon mari Sid Ali pour ses encouragements. A mes chères amies Ibtissam , Asmaa et Ahlam, pour tous les moments que nous avons partagés. A ma collégue FOUZIA qui ma accompagnée tout le long de la réalisation de ce travail. SARA Dédicace Avec l’aide d’Allah le tout puissant, j’ai pu achever ce modeste travail que je dédie : A mes très chers parents pour toutes les privations et sacrifices consentis, pour faire de moi une femme modèle. A ma sœur, mes frères et bien sûr mon fiancé pour toute sa patience. A ma collégue Sara qui ma accompagnée tout le long de la réalisation de ce travail. A tout mes cousines et cousins spécialement Meriem et Radouan et à tous mes amis. FOUZIA Résumé Cette étude consiste à mettre en évidence l’effet des métaux lourds sur les bactéries nodulant les légumineuses isolées à partir des nodules de Pisum sativum (le pois) et Vicia faba (la féve). L’étude phénotypique des souches porte sur les caractères morphologiques et culturaux, la recherche d’enzymes spécifiques, la résistance intrinsèque aux métaux lourds aux concentrations choisies ainsi que la mesure de croissance en milieu liquide en présence de différentes concentrations des métaux lourds. Les résultats obtenus font ressortir la résistance et la sensibilité des souches vis-à-vis des métaux lourds. Mots clés : Pisum sativum, Vicia faba, Métaux lourds. ABSTRACT This study is to highlight the effect of heavy metals on nodulating bacteria isolated from nodules legume Pisum sativum (peas) and Vicia faba (broad bean). The phenotypic study of stem covers the morphological and cultural characters, looking for specific enzymes, intrinsic resistance to heavy metals and the chosen concentrations in liquid medium growth measurement in the presence of different concentrations of heavy metals. The results highlight the strength and sensitivity vis-à-vis the heavy metal stem. Keywords: Pisum sativum, Vicia faba, Heavy metals. ﺺ ﻣﻠﺨ ھذه اﻟد راﺳﺔ ھو ﺗﺳﻠﯾط اﻟﺿ وء ﻋﻠﻰ ﺗﺄﺛﯾر اﻟﻣﻌﺎد ن اﻟﺛﻘﯾﻠﺔ ﻋﻠﻰ اﻟﺑﻛﺗﯾرﯾﺎ اﻟﺟذرﯾﺔ اﻟﻣﻌزوﻟﺔ ﻣ ن اﻟﻌﻘد اﻟﺟذرﯾﺔ ﻟﻠﺑزﻻء sativum) Pisum (و اﻟﻔ و ل) Vicia faba .( اﻟد راﺳﺔ اﻟﻣظﮭرﯾﺔ ﻟﺳﻼﻻ ت ﺗﻌﺗﻣد ﻋﻠﻰ اﻟﺻﻔﺎ ت اﻟﻣورﻓوﻟوﺟﯾﺔ،واﻟﺛﻘﺎﻓﯾﺔ وﺗﺑﺣ ث ﻋ ن إﻧزﯾﻣﺎت،ﻣﻌﯾﻧﺔ اﻟﻣﻘﺎ وﻣﺔ اﻟذاﺗﯾﺔ ﻟﻠﻣﻌﺎد ن اﻟﺛﻘﯾﻠﺔ وﺗرﻛﯾزات اﻟﻣﺧﺗﺎ رة ﻓﻲ ﻗﯾﺎس اﻟﻧﻣ و اﻟﻣﺗوﺳ ط اﻟﺳﺎﺋ ل ﻓﻲ وﺟ ود ﺗرﻛﯾزات ﻣﺧﺗﻠﻔﺔ ﻣ ن اﻟﻣﻌﺎد ن اﻟﺛﻘﯾﻠﺔ. اﻟﻧﺗﺎﺋﺞ ﺗﺳﻠ ط اﻟﺿ وء ﻋﻠﻰ ﻗ وة وﺣﺳﺎﺳﯾﺔ اﻟﺳﻼﻻ ت ﻣﻊ اﻟﻣﻌﺎد ن اﻟﺛﻘﯾﻠﺔ .ﻛﻠﻣﺎ ت اﻟﺑﺣ ث: sativum, Vicia faba Pisum ،واﻟﻣﻌﺎد ن اﻟﺛﻘﯾﻠﺔ. Liste des figures Figure 1 : Les différentes stratégies de phytoremédiation utilisées pour dépolluer les environnements contaminés en métaux lourds (Maynaud, 2012)………………………………………………..…………….5 Figure 2 : Dialogue moléculaire de la symbiose fixatrice d’azote entre la légumineuse hôte et le genre Rhizobium (Maynaud, 2012)………………………………………………………………………………......11 Figure 3 : Structure chimique d'un facteur Nod générique avec quelques une des substitutions que l'on trouve chez plusieurs espèces de Rhizobium (Cullimore et al., 2001)…………………………………12 Figure 4 : Phylogénie de quelques légumineuses (Udvardi et al., 2005)……………………………….14 Figure 5 Conservation des nodules sous CaCl2 (Vincent, 1970)………………………………………..24 Figure 6 : Croissance des souches sur Milieu TY en présence de ZnSO2…………………………31 Figure 7: Croissance des souches sur Milieu TY en présence de ZnSO4……………………………………………. …………………………………………………………32 Figure 8 : Croissance des souches sur Milieu TY en présence de ZnSO4…………………………...32 Figure 9 : Croissance des souches sur Milieu TY en présence de ZnSO4…………………………..33 Figure 10 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence de CuSO4……………………………………………………………………………………………………………………………………... 33 Figure 11 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence de CuSO4……………………………………………………………………………………………………………………………………..34 Figure 12 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence de CuSO4……………………..34 Figure 13 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence de CuSO4…………………………………………………………………………………………………………………………………..35 Figure 14 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence de Pb(COO) 2………………35 Figure 15 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence de Pb(COO) 2………………36 Figure 16 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence de Pb(COO) 2………………36 Figure 17: Croissance des souches sur bouillon TY en présence de Pb(COO) 2…………....37 Figure 18 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence de HgCl 2 ………….…...37 Figure 19 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence de HgCl 2 …………..…..38 Figure 20 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence de HgCl 2 …………..…..38 Figure 21 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence de HgCl 2 …………..…..39 Figure 22 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence CdCl2………………...….39 Figure 23 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence CdCl2……………………………...40 Figure 24 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence CdCl2 ………………………...….40 Figure 25 : Croissance des souches sur bouillon TY en présence CdCl2 …………..……………….41 Figure 26 : Croissance des souches sur bouillon TY en absence des métaux lourds……………………………………………………………………………………….…41 Figure 27 : Croissance des souches sur bouillon TY en absence des métaux lourds…………………………………………………………………………………...….…42 Figure 28 : Croissance des souches sur bouillon TY en absence des métaux lourds…………………………………………………………………………………………42 Figure 29 : Croissance des souches sur bouillon TY en absence des métaux lourds…………………………………………………………………………………...…….43 Liste des photos Photographie 1 : Le pois (Pisum sativum) (gepotany.newneglandwild.org)………………………..….15 Photographie 2: La féve (Vicia faba) (www.agroatlas.ru)....................................................................16 Photographie 3 : Pisum sativum …………………………………………………………………...…23 Photographie 4 : Vicia faba …………………………………………………………………………….23 Photographie 5 : Aspect des colonies de VF2 sur le milieu YMA………………………………………..29 Photographie 6 : Aspect des colonies de VF2 sur le milieu YMA+rouge Congo……………………....30 Photographie 7 : Observation microscopique des bactéries x 100……………………………………..30 Photographie 8 : Croissance de VF3 sur YMA+BTB……………………………………………………...31 Photographie 9 : Recherche du nitrate réductase…………………………………………………………32 Photographie 10: Activité cellulosique chez P……………………………………………………………..32 Photographie 11 : Hydrolyse de l’urée chez VF 1…………………………………………………………33 Photographie 12 : Croissance des isolats en présence de ZnSO4………………………………………………………….34 Photographie 13 : Croissance des isolats en uploads/Science et Technologie/ vicia-faba-la-feve.pdf