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22 J.I. M. Sfax, N°24; Octobre 16 ; 22 - 33 Résumé La fiabilité des tests de l'

22 J.I. M. Sfax, N°24; Octobre 16 ; 22 - 33 Résumé La fiabilité des tests de l'hémostase est fortement dépendante du respect des conditions pré-analytiques. Nous avons évalué, sur 10 plasmas, l'impact de la concentration (3,2 % et 3,8 %) et de la proportion du citrate de sodium trisodique (3 rapports volume anticoagulant/sang : 1V/9V, 1V/8V et 1V/10V) ainsi que des conditions de conservation du prélèvement (délais et températures) sur les tests de la coagulation [taux de prothrombine (TP), temps de céphaline + activateur (TCA), dosage du fibrinogène (Fg), facteur V (FV) et facteur VIII coagulant (FVIIIc)]. Résultats : influence variable des différentes conditions pré-analytiques sur les tests de coagulation. Le citrate à 0,129 M donne des activités basses du FV. Les valeurs moyennes des TP, TCA, Fg, FV et FVIIIc ont été plus abaissées après conservation des plasmas pendant 28 jours à - 20°C que celles obtenues après conservation pendant 28 jours à -70°C. Le choix de la concentration 3,2 % du citrate est préférable en termes de fiabilité des résultats. La conservation des plasmas à -70 °C assure une meilleure stabilité de l’activité des facteurs de la coagulation. Une étude sur une population plus large, plus diversifiée et incluant d’autres tests de l’hémostase permettra de consolider ces résultats et tester d’autres variables pré-analytiques. Mots clés : anticoagulant ; conservation ; hémostase ; variables pré-analytiques. Abstract The reliability of hemostasis testing is highly dependent on respect to pre-analytical variables. We evaluated, on 10 plasmas, the effect of sodium citrate concentration (3,2 % and 3,8 %) and proportion (3 ratios of anticoagulant to blood : 1V/9V, 1V/8V and 1V/10V) as well as sample storage conditions (time and temperatures) on the results of coagulation testing [prothrombin time (PT), activated partial thromboplastin time (aPTT), fibrinogen (Fg) concentration, factor V (FV) and VIII coagulant (FVIIIc) activities]. Results: variable influence of the different pre-analytical conditions on coagulation testing. 0,129 M citrate produced low activities of FV. The average values of PT, aPTT, Fg, FV and FVIIIc were lowered after the storage of plasmas for 28 days at -20°C than those obtained after storage for 28 days at -70°C. The choice of 3.2% citrate concentration is preferable in terms of results's reliability. . Plasmas specimens kept at -70 ° C had better stability of the activity of factors of coagulation. A study on a larger and more diversified population and including other hemostasis testing is required to consolidate these results and to test other preanalytical variables Key words: anticoagulant; haemostasis; pre-analytical variables; storage. ﻣﻠﺨﺺ ﻣﻮﺛﻮﻗﯿﺔ اﺧﺘﺒﺎر اﻻرﻗﺎء ﺗﻌﺘﻤﺪ اﻋﺘﻤﺎدا ﻛﺒﯿﺮا ﻋﻠﻰ اﻻﻣﺘﺜﺎل ﻟﺸﺮوط ﻣﺎ ﻗﺒﻞ اﻟﺘﺤﻠﯿﻞ . ﻗﻤﻨﺎ ﺑﺘﻘﯿﯿﻢ ﻋﻠﻰ10 ﻋﯿﻨﺎت ﺑﻼزﻣﺎ ﻟﺪراﺳﺔ ﺗﺄﺛﯿﺮ ﺗﺮﻛﯿﺰ) 3.2 ٪ و3.8 ٪ (وﻧﺴﺒﺔ ﺳﺘﺮات ﺛﻼﺛﻲ اﻟﺼﻮدﯾﻮم ) 3 إﻣﻜﺎﻧﯿﺎت ﺣﺠﻢ ﻣﻀﺎدة ﻟﻠﺘﺨﺜﺮ /اﻟﺪم : 1 ﻣﻦ8 و1 ﻣﻦ9 و1 ﻣﻦ10 (، وﻛﺬﻟﻚ ﻇﺮوف ﺗﺨﺰﯾﻦ اﻟﻌﯿﻨﺔ)اﻟﻮﻗﺖ ودرﺟﺔ اﻟﺤﺮارة (ﻓﻲ اﺧﺘﺒﺎرات اﻟﺘﺨﺜﺮ اﻟﻌﺎﻣﺔ و ﻓﺤﺺ اﻟﻔﯿﺒﺮﯾﻨﻮﺟﯿﻦ و اﻟﻌﺎﻣﻞ اﻟﺨﺎﻣﺲ و اﻟﺜﺎﻣﻦ ﻟﻠﺘﺨﺜﺮ .اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ : ﺗﺄﺛﯿﺮ ﻣﺘﻐﯿﺮ ﻟﻤﺨﺘﻠﻒ اﻷوﺿﺎع ﻣﺎ ﻗﺒﻞ اﻟﺘﺤﻠﯿﻞ ﻓﻲ اﺧﺘﺒﺎرات اﻟﺘﺨﺜﺮ . وﺳﺘﺮات0.129 ﯾﻌﻄﻲ اﻧﺨﻔﺎض اﻟﻨﺸﺎط ﻟﻠﻌﺎﻣﻞ اﻟﺨﺎﻣﺲ ﻟﻠﺘﺨﺜﺮ . ﺗﻢ ﺗﺨﻔﯿﺾ ﻣﺘﻮﺳﻂ ﻗﯿﻢ إﺧﺘ ﺒﺎرات اﻟﺘﺨﺜﺮ أﻛﺜﺮ ﺑﻌﺪ اﻟﺘﺨﺰﯾﻦ ﻟﻤﺪة28 ﯾﻮﻣﺎ ﻓﻲ اﻟﺒﻼزﻣﺎ ﻋﻨﺪ درﺟﺔ ﺣﺮارة ء20 درﺟﺔ ﻣﺌﻮﯾﺔ ﻣﻦ ﺗﻠﻚ اﻟﺘﻲ ﺗﻢ اﻟﺤﺼﻮل ﻋﻠﯿﮭﺎ ﺑﻌﺪ اﻟﺘﺨﺰﯾﻦ ﻟﻤﺪة28 ﯾﻮﻣﺎ ﻓﻲ ء70 درﺟﺔ ﻣﺌﻮﯾﺔ . اﺧﺘﯿﺎر ﺗﺮﻛﯿﺰ3.2 ﺳﯿﺘﺮات ھﻮ اﻷﻓﻀﻞ ﻣﻦ ﺣﯿﺚ اﻟﻤﻮﺛﻮﻗﯿﺔ٪ . .دراﺳﺔ ﻋﻠﻰ ﻋﺪد أﻛﺒﺮ ﻣﻦ اﻷﺷﺨﺎص. وأﻛﺜﺮ ﺗﻨﻮﻋﺎ ﺗ ﺸﻤﻞ إﺧﺘﺒﺎرات إرﻗﺎء أﺧﺮى ﺗﻤﻜﻦ ﻣﻦ ﺗﺮﺳﯿﺦ ھﺬه اﻟﻨﺘﺎﺋﺞ واﺧﺘﺒﺎر ﻣﺘﻐﯿﺮات أﺧﺮى ﻣﺎ ﻗﺒﻞ اﻟﺘﺤﻠﯿﻞ اﻟﻜﻠﻤﺎت اﻟﻤﻔﺎﺗﯿﺢ: ﺗﺨﺜﺮ ; ﺗﺨﺰﯾﻦ اﻟﻌﯿﻨﺔ ; ﻣﺘﻐﯿﺮات ﻣﺎ ﻗﺒﻞ اﻟﺘﺤﻠﯿﻞ. EFFET DE L’ANTICOAGULANT ET DE LA CONSERVATION DES ECHANTILLONS SANGUINS SUR LES TESTS D’EXPLORATION DE LA COAGULATION EFFECT OF ANTICOAGULANT AND STORAGE OF BLOOD SAMPLES FROM CLOTTING EXPLORATION TESTS N. LOUATI1, 2*, I. BEN AMOR1, 2, G. DAOUED1, 2, et J.GARGOURI1, 2 1 : CRTS de Sfax -Tunisie 2 : Faculté de médecine, université de Sfax-Tunisie *Email de l’auteur correspondant : nourlouati@yahoo.fr Article Original 23 J.I. M. Sfax, N°24; Octobre 16 ; 22 - 33 1. INTRODUCTION La coagulation plasmatique a pour but la formation d’un thrombus solide qui vient renforcer le clou plaquettaire fragile afin d’arrêter l’hémorragie. L’exploration de la coagulation se fait in vitro par plusieurs méthodes destinées à l’étude, soit d’une phase de la coagulation, soit d’un facteur particulier. Les résultats de ces tests doivent refléter de façon fiable les valeurs in vivo. La fiabilité des résultats obtenus est fortement dépendante du respect des conditions pré- analytiques. Le non-respect ou la négligence de ces dernières serait à l’origine, d’une part, de coûts supplémentaires (en personnel, matériel, temps et énergie) en cas d’échantillon défectueux obligeant à refaire le prélèvement, et, d’autre part, de résultats inadéquats pouvant amener à des examens complémentaires inutiles et même à des conduites thérapeutiques erronées [1]. Les composantes de l’étape pré-analytique sont nombreuses. Il s’agit, notamment, du prélèvement sanguin (anticoagulant utilisé, amorce de coagulation, contamination….), de sa conservation (température, durée…), de son transport et de sa préparation avant son analyse technique (centrifugation, congélation /décongélation éventuelle). En 2007, le GEHT (Groupe d’Etudes sur l’Hémostase et la Thrombose) a actualisé ses recommandations en précisant notamment que l’anticoagulant de référence est le citrate de sodium trisodique à 3,2% soit 0,109 M avec un rapport anticoagulant / sang de 1 pour 9 (1V/9V). Il recommande également un délai inférieur à 2 heures entre le prélèvement et l’exécution des tests d’hémostase [2]. Dans ce travail, nous nous sommes proposés d’évaluer l'impact de la concentration et de la proportion du citrate de sodium trisodique ainsi que des conditions de conservation du prélèvement sur les résultats des tests de la coagulation [taux de prothrombine (TP), temps de céphaline avec activateur (TCA), dosage du fibrinogène (Fg), facteur V(FV) et facteur VIII coagulant (FVIIIc)]. 2. MATERIEL ET METHODES Notre étude a porté sur 10 donneurs de sang (DDS) volontaires sains âgés de 20 à 25 ans et n'ayant pas, à l'interrogatoire pré-don, d’antécédents personnels ou familiaux de troubles de l’hémostase. 2.1. Prélèvements sanguins et traitement des échantillons Pour chaque DDS, nous avons effectué un prélèvement de sang veineux périphérique sur 4 tubes : 1. un tube avec citrate de sodium 0,109 M (3,2%) à raison de 1V/9V. 2. un tube avec citrate de sodium 0,129 M (3,8%) à raison de 1V/9V. 3. un tube avec citrate de sodium 0,109 M (3,2%) à raison de 1V/8V. 4. un tube avec citrate de sodium 0,109 M (3,2%) à raison de 1 V/10V. Tous les autres aspects de la phase pré-analytique ont respecté les recommandations du GEHT. Les tubes ont été centrifugés immédiatement après le prélèvement à la vitesse de 3000 tours/mn pendant 15 minutes pour obtenir le plasma pauvre en plaquettes (PPP).Les tests de coagulation ont été réalisés immédiatement pour tous les échantillons plasmatiques. De plus, chaque PPP prélevé sur citrate de sodium 0,109M à raison de 1V/9Va été décanté dans 2 tubes : -le premier a été conservé à température ambiante puis testé après des délais de 6 heures,12 heures et 24 heures après le prélèvement. -le deuxième a été recentrifugé (3000 tours/mn pendant 15 minutes) puis décanté dans des aliquots conservés dans différentes conditions :  congélation à -20°C puis réalisation des tests après des délais différents (J7, J14, J21, J28).  congélation à -70°C pendant 28 jours. 2.2. Tests de coagulation Nous avons mesuré le TP (en %), le TCA (en secondes), les taux du Fg et des FV et VIIIc de la coagulation par des techniques chronométriques au moyen du semi-automate ST-Art4 (DIAGNOSTICA STAGO).Les mesures du TP, du TCA et du taux de Fg ont été effectuées en utilisant, respectivement, les réactifs NEOPLASTINE® CI PLUS, CK-PREST®, et FIBRIPREST® (DIAGNOSTICA STAGO). Les facteurs V et VIII ont été dosés au moyen des réactifs STA®-DEFICIENT V et STA®- DEFICIENT VIII (DIAGNOSTICA STAGO) respectivement. Le principe du dosage consiste à mesurer, en présence de néoplastine pour le FV et N. LOUATI et al. 24 J.I. M. Sfax, N°24; Octobre 16 ; 22 - 33 de céphaline et activateur pour le FVIIIc, le temps de coagulation d’un système où tous les facteurs sont présents et en excès à l’exception du facteur à doser qui est apporté par le plasma testé dilué au 1/10 en tampon OwrenKoller. Les résultats ont été exprimés en pourcentage d’activité par rapport à un plasma contrôle (UNICALIBRATEUR®) d’après une droite d’étalonnage. Chaque échantillon a été testé en double au cours de la même réaction selon les recommandations du fabricant. Le taux considéré correspondait à la moyenne des 2 mesures. 2.3. Etude Statistique Nous avons utilisé le test t de Student pour la comparaison des moyennes d’une variable quantitative. Le seuil de signification a été fixé à 0,05. 3. RÉSULTATS Les résultats des tests de coagulation effectués chez les DDS, en fonction des divers supports de prélèvement et des différentes conditions de conservation sont résumés dans les tableaux I à V. 3.1. Résultats des tests d’hémostase en fonction de la concentration du citrate Nous n’avons pas trouvé de différence significative des résultats du TP, TCA, Fg et FVIIIc entre les deux concentrations de citrate utilisées. Par contre, le taux uploads/Sante/article04-24.pdf