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ROYAUME DU MAROC UNIVERSITE MOHAMED V FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMACIE RABAT

ROYAUME DU MAROC UNIVERSITE MOHAMED V FACULTE DE MEDECINE ET DE PHARMACIE RABAT Mémoire de Fin de Spécialité -Pharmacie Industrielle- Réalisé par : Dr. Zineb ALIAT Encadré par : Pr. Mustapha BOUATIA Pour l’obtention du Diplôme de Spécialité Année 2020 Screening phytochimique et évaluation de l’activité antioxydante et antilithiasique de Juncus acutus 2 Je tiens à exprimer toute ma reconnaissance à mon encadrant de mémoire Pr Mustapha BOUATIA. Je le remercie de m’avoir encadrée, orientée, aidée et conseillée. J’adresse mes sincères remerciements à tous les professeurs, intervenants et toutes les personnes du laboratoire de chimie analytique pour avoir mis à ma disposition l’aide et le matériel nécessaires pour la réalisation de ce travail. A tous ces intervenants, je présente mes remerciements, mon respect et ma gratitude REMERCIEMENT 3 Table des matières RESUME: ........................................................................................................................... 7 INTRODUCTION : ............................................................................................................... 8 MATERIEL ET METHODES : ................................................................................................. 9 Matériel végétal : ................................................................................................................................. 9 Préparation des extraits : ..................................................................................................................... 9 Caractérisation phytochimique : ........................................................................................................ 10 Détermination des polyphénols totaux : ........................................................................................... 10 Dosage des flavonoïdes totaux : ........................................................................................................ 11 Activité antioxydante: ........................................................................................................................ 11 Activité antilithiasique :...................................................................................................................... 12 Analyses statistiques : ........................................................................................................................ 13 RESULTATS ET DISCUSSION : ............................................................................................ 13 Rendements d’extraction : ................................................................................................................. 13 Caractérisation physicochimique : ..................................................................................................... 13 Polyphénols totaux:............................................................................................................................ 14 Flavonoïdes totaux : ........................................................................................................................... 15 Ativité antioxydante: .......................................................................................................................... 16 Activité antilithiasique :...................................................................................................................... 19 Conclusion: ..................................................................................................................... 22 Références: ..................................................................................................................... 23 4 LISTE DES TABLEAUX Tableau 1 : Screening de quelques groupes phytochimiques de 4 extraits de Juncus acutus Tableau 2 : Teneur totale en polyphénols exprimée en milligrammes équivalent d'acide gallique par gramme de poudre de Juncus acutus Tableau 3 : Teneur totale en flavonoïdes exprimée en milligrammes équivalents de Quercétine par gramme de poudre de Juncus acutus 5 LISTE DES FIGURES Figure 1 : Pourcentage d’inhibition des radicaux libres des différents extraits de Juncus acutus en utilisant le test DPPH. Figure 2 : Les valeurs de capacité de piégeage des radicaux DPPH (IC50) des différents extraits de Juncus acutus Figure 3 : Pouvoir réducteur des extraits de Juncus acutus Figure 4 : Test au phosphomolybdate de Juncus acutus Figure 5 : Taux de dissolution des calculs de cystine dans l'extrait de Juncus acutus et la solution témoin Figure 6 : Taux de dissolution des calculs d'acide urique dans l'extrait de Juncus acutus et la solution témoin Figure 7 : Taux de dissolution des calculs de carbapatite dans l'extrait de Juncus acutus et la solution témoin 6 LISTE DES ABREVIATIONS AA : Acide Ascorbique ABTS : Sel d'ammonium d'acide 2,2'-azinobis-3-éthylbenzothiazoline-6-sulfonique AE : Acétate d’ethyle BHA : Butylhydroxyanisole BHT : Butylhydroxytoluène DPPH : Diphényl-picrylhydrazyl FRAP : Ferric Ion Reducing Antioxidant Parameter FTIR : Spectrophotométrie Infrarouge à Transformée de Fourier MET : Méthanol ORAC : Oxygen Radical Absorbance Capacity TRAP : Total Radical Trapping Antioxidant Parameter UV-V : Ultraviolet-Visible 7 RESUME: L'objectif de ce travail était de réaliser un screening phytochimique des graines de Juncus acutus et d'évaluer son activité antioxydante et son activité antilithiasique. Le screening phytochimique a démontré la présence de catéchine, de tanins et d'alcaloïdes dans les différents extraits étudiés. L'activité antioxydante des extraits méthanoliques et d'acétate d'éthyle par ultrasons et macération a été évaluée par la méthode du DPPH, du FRAP et du phosphomolybdate. L'extrait d'acétate d'éthyle par ultrasons, l'extrait méthanolique par macération et ultrasons ont respectivement montré une IC50 avec DPPH de 1,449 mg / ml, 1,535 mg / ml et 4,771 mg / ml et un pouvoir réducteur a été observé à des concentrations de 419,561 mg BHA / 100 g, 207,143 mgBHA / 100g et 142,20mgBHA / 100g par la méthode de FRAP et à des concentrations de 839,470mg AAE/100g, 283,260mgAAE / 100g et 141,018mgAAE / 100g par le test au phosphomolybdate. La détermination des polyphénols totaux de l'extrait d'acétate d'éthyle par ultrasons, de l'extrait méthanolique par macération et par ultrasons a présenté respectivement des teneurs de 2,428 mg GAE/g, 1,960 mg GAE/g et 1,172 mg GAE/g, de même, le dosage des flavonoïdes a montré respectivement des concentrations de 14,469 mg EQ/g, 6,466 mg EQ/g et 3,143 mg EQ/g. L'activité antilithiasique a été évaluée sur des calculs de Carbapatite, de Cystine et des calculs d'acide urique. La perte de masse d'acide urique, de carbapatite et de cystine était respectivement de 42%, 7% et 16%. 143 mg EQ / g. Mots clés: Juncus acutus - Activité antioxydante - Activité antilithiasique – flavonoïdes - polyphénols. 8 INTRODUCTION : Les plantes médicinales sont le principal remède pour la fabrication de remèdes pharmaceutiques. En effet, les substances naturelles provenant des plantes ont de multiples intérêts mis à profit dans le système de soins traditionnel et dans différentes industries. Parmi ces composés, on retrouve dans une large mesure les métabolites secondaires qui sont particulièrement illustrés en thérapeutique [Hebi et Eddouks, 2016]. Dans notre étude, nous nous concentrerons sur les activités antioxydante et antilithiasique de Juncus acutus. Les antioxydants les plus populaires sont l'acide ascorbique (vitamine C),-carotène (Provitamine A), tocophérol (Vitamine E) et les composés phénoliques. En effet, la plupart des antioxydants synthétiques ou naturels ont des groupes hydroxyphénoliques dans leurs structures et les propriétés antioxydantes sont attribuées en partie à la capacité de ces composés naturels à piéger les radicaux libres tels que les radicaux hydroxyles et les superoxydes [Rice-Evanset al.,1995; Bartosz, 2003; Popovici et al., 2010]. Plusieurs méthodes sont utilisées pour évaluer, in vitro et in vivo, l'activité antioxydante en piégeant différents radicaux, tels que les peroxydes par la méthode ORAC (Oxygen Radical Absorbance Capacity ou capacité d'absorption des radicaux libres), par le TRAP (Total Radical Trapping Antioxidant Parameter) [Ricardo da Silva et al., 1991]; par la méthode au FRAP (Ferric Ion Reducing Antioxidant Parameter) [Benzie et souche, 1996]; ou par les radicaux ABTS (sel d'ammonium d'acide 2,2'-azinobis-3-éthylbenzothiazoline-6-sulfonique) [Re et al., 1999], ainsi que la méthode utilisant le radical libre DPPH (Diphényl-picrylhydrazyl) [Popovici et al., 2010; Sharma Om et Bhat, 2009]. Dans notre étude, trois méthodes seront utilisées pour évaluer cette activité: FRAP, DPPH et test au phosphomolybdate. 9 Au Maroc tel que rapporté par Bouatia et al. (2015), le type de calculs prépondérant était l'oxalate de calcium monohydraté (56,4%), suivi par l'acide urique (18,1%), de la carbapatite (7,9%) et de la cystine (0,6%). Dans cette étude, nous avons choisi d'étudier l'effet des extraits de Juncus acutus sur la les calculs rénaux de la carbapatite, l'acide urique et la cystine. Cette étude s'est fixée comme principaux objectifs : • Réalisation d'un screening phytochimique pour rechercher certains groupes phytochimiques. • Détermination des polyphénols totaux et des flavonoïdes totaux contenus dans les graines de Juncus acutus. • Etude de l'activité antioxydante des extraits méthanoliques et de l'acétate d'éthyle de Juncus acutus. • Etude de l'activité antilithiasique des extraits méthanoliques et de l'acétate d'éthyle de Juncus acutus. MATERIEL ET METHODES : Matériel végétal : L'échantillon prélevé provient de la région sud du Maroc. Au laboratoire, nous avons broyé les graines de Juncus acutus avec un broyeur jusqu'à obtention d'une poudre fine. Préparation des extraits : Nous avons utilisé deux types d’extraction : la macération sous agitation pendant 24 heures et l'extraction aux ultrasons pendant 60 minutes.  Extraction par macération: 40 g de poudre des graines de Juncus acutus sont extraits dans 100 ml d'acétate d'éthyle par macération sous agitation pendant 24 heures à température ambiante. Après filtration et séchage 10 de la même poudre, une deuxième extraction dans 100 ml de méthanol a été réalisée dans les mêmes conditions précédemment décrites.  Extraction par ultrasons: 40 g de poudre des graines de Juncus acutus sont extraits dans 100 ml d'acétate d'éthyle sous ultrasons pendant 60 minutes à 39 ° C. Après filtration et séchage de la même poudre, une deuxième extraction dans 100 ml de méthanol a été réalisée dans les mêmes conditions précédemment décrites. Les 4 filtrats sont concentrés dans une étuve à 40 ° C afin de se débarrasser du solvant et de récupérer les extraits. Les 4 extraits ainsi récupérés, sont conservés dans des flacons stériles au réfrigérateur. Caractérisation phytochimique : Nous avons effectué, séparément, des réactions qualitatives sur nos différents extraits de Juncus acutus pour le screening de certains groupes phytochimiques en utilisant les méthodes de Harborne (1998),Trease et Evans (1989) ainsi rapporté par Buvaneswari et al. (2011) et Touré (2015). Détermination des polyphénols totaux : La teneur totale en composés phénoliques a été déterminée en utilisant la méthode de Folin Ciocalteu [Hashemi et al., 2016]. 1,25 ml du réactif Folin (dix fois dilué) a été ajouté à 250 µl d'extrait ou d'étalon (préparé dans le méthanol) avec des concentrations allant de 0,3 à 3 mg/ml. Après 4 min, 1 ml d'une solution de carbonate de sodium (7,5 g/100 ml) est ajouté au mélange précédent. L'ensemble est incubé dans l'obscurité à température ambiante pendant 30 min. L'absorbance a été mesurée à 765 nm. La concentration des polyphénols totaux est exprimée en milligrammes équivalent d'acide gallique par gramme d'extrait (mg GAE / g d'extrait). 11 Dosage des flavonoïdes totaux : La méthode du trichlorure acétique [Tohma et al., 2016] est utilisé pour estimer les flavonoïdes totaux dans les extraits. 1,5 ml de la uploads/Geographie/ plant-phospho.pdf