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Rédigé par : Vérifié par : Validé par : Nom JOFACK BERTHOL MBEP Christian Dr ATEBA Ghislaine Date Signatures 1. OBJECTIFS ET PORTÉE a. Objectif La réalisation du test de l’antigène HBe permet de déterminer si le virus de l’hépatite B présent chez un patient est en phase de multiplication b. Personnes concernées Personnel de l’unité des ELISA 2. Domaine d’application Unité des ELISA 3. RÉFÉRENCES Fiche d’utilisation du réactif antigène HBe (KITE MELSIN) 4. TACHES, AUTORISATIONS ET RESPONSABILITÉS Tâches Personnes autorisées Responsables Réalisation du test Personnels de l’unité des ELISA JOFACK BERTHOL Validation du test Personnels de l’unité des ELISA et le responsable technique MBEP Christian CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ag HBe Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : 5. PRINCIPE Le principe du dosage de l’antigène HBe repose sur la méthode ELISA sandwich. Les anticorps spécifique sont fixé au font des puits l’ajout du sérum ou du plasma et l’ajout du conjugué permet la formation d’un complexe immun après une période d’incubation les éléments non fixés sont retirer par lavage puis l’ajout du substrat (TMB) et en fin une solution stop est ajouté pour l’arrêt de la réaction avec formation d’une coloration jaune. L’intensité de la coloration est proportionnelle à la concentration des anticorps présent dans le sérum. 6. PROTOCOL DE REALISATION DU TEST PREPARATION DE LA SOLUTION DE LAVAGE Elle se fait en diluant la solution Wash buffer avec de l’eau distillée : 1/20 Multiplier la concentration du Wash buffer avec le volume total du flacon pour avoir le volume total d’eau distillée à utiliser. NB : laisser les réactifs à température ambiante pendant 30min au minimum avant l’utilisation MODE OPERATOIRE - Ajouter 50ul (03 CN, CP, et Echantillon) sauf le blanc - Ajouter 50ul du HRP conjugué dans les puits sauf le blanc, mixé en tapotant la plaque doucement - Incuber 30min à 37 ͦ c - Laver 05 fois avec la solution de lavage (régler le combis Wash à 350- 400ul de solution par puits) - Ajouter 50ul de Chromogène A et 50ul de chromogène B, incubé 15min à 37°c à l’abri de la lumière - Ajouter 50ul du Stop et mixer gentiment - Lire à 450nm de densité optique pendant les 10min qui suivent l’ajout du stop Si les puits sont doublés ou triplé toujours faire la moyenne des DO pour avoir la DO finale Interprétation des résultats : méthode qualitatifs Cutt-off (CO) ¿ MCN 3 X 2,1 - Si DOP CO <1 → NEGATIVE - Si DOP CO =0,9−1,1→ refaire le test en doublant les puits du patient et si même résultat est observé, - considéré POSITVE - Si DOP CO <1 → NEGATIVE CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ag HBe Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : 7. MATERIELS UTILISES Micropipette Plaque pour les puits Puits pour le test Réactif Gants Embouts Chronomètre Fiche de paillasse Combi Wash Huma Reader - CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ac HBe Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 Sign val : CERIMED ANALYSES BIOMEDICALES PROCÉDURE DE REALISATION DE L’Ag HBe Pages : Applicable le : Code : P001 Version : 1 ATTESTATION DE LECTURE Je reconnais avoir lu et compris la Procédure de Rédaction des Procédures Ref : CERIMED SOP 001, version 1 11 uploads/Management/ pos-ag-hbe.pdf