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PHILIPPE LACHANCE CORRELATION ENTRE CERTAINS POLYMORPHISMES GENETIQUES ET L'EXP

PHILIPPE LACHANCE CORRELATION ENTRE CERTAINS POLYMORPHISMES GENETIQUES ET L'EXPRESSION DE CERTAINS FACTEURS DE RISQUE DE MALADIE CORONARIENNE Mémoire présenté à la faculté des études supérieures de l'Université Laval dans le cadre du programme de maîtrise en médecine expérimentale pour l'obtention du grade de maître es sciences (M.Se.) FACULTE DE MEDECINE UNIVERSITÉ LAVAL QUÉBEC 2009 © Philippe Lachance, 2009 Résumé La maladie coronarienne est la première cause de mortalité dans le monde ayant emporté 7.6 millions d'individus en 2005. Plusieurs facteurs de risque pour cette maladie ont été identifiés dont l'un des plus importants est la présence d'une dyslipidémie. L'hyperréactivité plaquettaire a récemment été ajoutée à cette liste. Bien que le cholestérol soit naturellement présent et que les plaquettes soient réactives chez tous les individus, ces paramètres varient d'une personne à l'autre. Plusieurs études ont été réalisées afin de déterminer les causes de cette variation. L'une des hypothèses les plus étudiées à l'heure actuelle est celle de polymorphismes localisés sur les gènes codant pour des protéines clées dans le métabolisme du cholestérol et des plaquettes. De nombreuses investigations ont été réalisées dans cette optique, mais l'impact de plusieurs polymorphismes reste à être déterminé et les conclusions de précédentes études doivent être validées. La réalisation de ces travaux est importante puisque la découverte de gènes permettant de prédire certains facteurs de risque permettrait de détecter précocement les sujets à risque et ainsi potentiellement sauver des vies. Nous avons donc réalisé cette étude afin de déterminer l'impact du polymorphisme -18 C>A du récepteur NPC1L1 sur les niveaux d'apo B100 et de valider l'effet rapporté du polymorphisme TaqEB de la protéine de transfert des esters du cholestérol sur les niveaux de HDL-cholestérol que nous avons évalués par la mesure de l'apo Al. Finalement, nous avons tenté de déterminer si l'effet du polymorphisme i-T744C du récepteur P2Y12 des plaquettes sur la survenue d'un second événement coronarien peut s'expliquer par l'impact de ce polymorphisme sur la concentration de protéine C-réactive. Pour ce faire, nous avons recruté 176 sujets ayant présenté un infarctus aigu du myocarde pour lesquels nous avons déterminé le génotype pour les polymorphismes mentionnés précédemment ainsi que mesuré les concentrations d'apo B100, d'apo Al et de protéine C-réactive. Les résultats de la présente étude ne permettent pas de conclure définitivement si les polymorphismes étudiés ont ou n'ont pas d'impact sur ces paramètres. Ce qui apparaît toutefois à l'analyse des résultats, c'est que si ces mutations ont un effet sur les paramètres étudiés, cet effet est probablement mineur. Abstract Coronary artery disease (CAD) is the leading cause of death around the world, killing over 7.6 millions people in 2005. Several risk factors of CAD have been identified. One of the most important is the presence of dyslipidemia. Recently, increased platelet activity has been added to the list. Although cholesterol is naturally present and blood and platelets are normally reactive, wide variations in these parameters have been observed among individuals. Several studies have been conducted to determine the cause of this variability. One of the most studied hypothesis is the study of polymorphisms located in genes coding for key proteins involved in cholesterol and platelet metabolism. Many investigations have been conducted in this field but the impact of several polymorphisms still need to be assessed and conclusions of previous studies need to be validated. This is of importance since the identification of polymorphisms that accurately predict one of these factors will allow for early detection of people at risk, with the potential to save lives. Thus, we conducted this study to determine the impact of mutation -18 C>A of the NPC1L1 transporter on apo B100 and to validate the previously observed impact of polymorphism TaqlB of the cholesteryl ester transfer protein on HDL-cholesterol level assessed using apo Al. Finally, we sought to determine if the relation observed between polymorphism i- T744C of the P2Y12 platelet receptor and a higher rate of recurrent cardiovascular events after myocardial infarction was related to a higher level of C-reactive protein. We recruited 176 patients with acute myocardial infarction who underwent urgent percutaneous coronary intervention. In all subjects, we obtained a genotype for each studied polymorphism and the level of apo B100, apo Al and C-reactive protein. The results of the present study did not confirm the impact of the above mentioned polymorphisms on studied parameters. However, it appears that if an effect is present, it is of minor importance. Avant-propos Tout d'abord, je tiens à remercier mon directeur, le Dr Jean-Pierre Déry ainsi que mon co-directeur, le Dr Paul Poirier. Ces derniers m'ont donné le goût de la recherche de par leur rigueur, leur passion ainsi que de par leur sens de la pédagogie. Grâce à eux, j'ai pu, malgré le peu de temps qui m'était alloué, faire un tour d'horizon assez complet de ce monde passionnant qu'est celui de la recherche clinique. De par le temps que j'ai eu le privilège de passer avec eux, j'ai pu être initié à la réalité du clinicien chercheur. Nul doute que je termine cette vaste entreprise de deux ans fort d'une plus grande maturité, plus riche d'un important bagage de connaissances, mais surtout avec des objectifs de carrière bien précis, qui sauront m'animer et me motiver jusqu'à la fin de ce long chemin qu'est celui des études de médecine et même après lorsque je me serai engagé dans le sentier de ma carrière professionnelle. Je tiens aussi à remercier mes collègues de travail. Tout d'abord, madame Suzanne Keilani qui fut d'une aide inestimable dans la réalisation de ce projet. Ensuite, le Dr Yohan Bossé pour ses conseils précieux quant aux choix des méthodes d'analyses génétiques ainsi que pour l'analyse des résultats. De même, merci à madame Sarah- Édith Penney qui a bien voulu prendre le temps de m'initier à la réalisation d'expériences en génétique. Je voudrais remercier Robert Fournier, Jacynthe Harnois, Guy Rossignol et France Larochelle pour leur support à travers ces années que j'ai eu le plaisir de passer au centre de recherche de l'Hôpital Laval. J'aimerais remercier le Fonds de Recherche en Santé du Québec dont le support financier m'a permis de me concentrer pleinement sur la réalisation de ce projet. Je ne pourrais passer sous silence le soutient indéfectible de mes parents Angèle et Roger et de mon frère Olivier. Finalement, un merci tout spécial à mon amoureuse, Sarah dont l'amour, l'écoute, la grande compréhension et le support au quotidien m'ont permis de traverser les différentes embûches qui se sont dressées sur mon chemin tout au long de la réalisation de cette entreprise. ni TABLE DES MATIERES RESUME I ABSTRACT H AVANT-PROPOS m TABLE DES MATIÈRES IV LISTE DES TABLEAUX VI LISTE DES FIGURES VIII LISTE DES ABRÉVIATIONS L X INTRODUCTION 1 CHAPITRE 1 : LE CONTEXTE THEORIQUE 5 SECTION 1 : LE CHOLESTEROL 6 1.1. Métabolisme du cholestérol 7 1.1.1. Métabolisme des chylomicrons 7 1.1.2. Métabolisme des lipoprotéines qui contiennent F apo B100 8 1.1.3. Métabolisme des lipoprotéines de haute densité 9 1.2. Les gènes à l'étude dans le métabolisme du cholestérol 10 1.2.1. Le transporteur Nieman-Pick Cl like 1 (NPC1L1) 10 1.2.1.1. Caractérisation 10 1.2.1.2. Fonction 11 1.2.1.3. Génétique 12 1.2.2. La protéine de transfert des esters du cholestérol (CETP) 14 1.2.2.1. Caractérisation 14 1.2.2.2. Fonction 15 1.2.2.3. Génétique 16 1.3 Mesure des paramètres lipidiques chez le patient en infarctus aigu 18 SECTION 2 : LES PLAQUETTES 21 1.4. Physiologie plaquettaire 22 1.5. Le gène à l'étude pour la physiologie plaquettaire 24 1.5.1. Le récepteur P2Y12 24 1.5.1.1. Caractérisation 24 1.5.1.2. Fonction 24 1.5.1.3. Génétique 25 1.6. Relation entre l'inflammation et les maladies cardiovasculaires 27 1.7. Objectifs et hypothèses 29 CHAPITRE 2 : LA METHODE 31 2.1. Contexte 32 2.2. Population à l'étude 32 2.3. Critères d'exclusions 32 2.4. Choix de la population à l'étude 32 2.5. Traitement de l'infarctus aigu 33 2.6. Prélèvement des échantillons et analyses initiales 34 2.7. Suivi 34 2.8. Extraction de l'ADN génomique 35 2.9. Préparation des échantillons d'ADN 35 2.10. Fabrication des amorces pour les réactions d'amplification 36 2.11. Amplification des sections d'ADN 36 2.12. Préparation du gel d'agarose 37 2.13. Mise sur gel des produits PCR 37 2.14. Génotypage des sujets 38 2.12.1. Polymorphismes TaqIB de la CETP et i-T744C du récepteur P2Y12 38 2.12.2. Polymorphisme-18 C>A du transporteur NPC1L1 39 2.13. Mesure des paramètres lipidiques chez les patients en infarctus aigu 40 2.14. Mesure de l'état inflammatoire systémique 40 iv 2.15. Mesure de l'agrégation plaquettaire 41 2.16. Éthique et confidentialité des résultats 41 2.17. Analyse des résultats 42 CHAPITRE 3 : LES RESULTATS 46 3.1. Caractéristiques cliniques de la population à l'étude 47 3.2. Distribution des génotypes dans la population à l'étude 48 3.3. Résultats pour la mutation -18 C>A du récepteur NPC1L1 49 3.4. Résultats pour le polymorphisme TaqIB de la CETP 52 3.4.1. Effet du polymorphisme sur les concentrations d'apo Al 52 3.5.2. Effet du polymorphisme sur le rapport apo B100/apo Al 56 3.6. Résultats pour le polymorphisme i-T744C du récepteur P2YI2 des plaquettes 59 CHAPITRE 4 : DISCUSSION ET CONCLUSION 69 4.1. Le polymorphisme -18 C>A uploads/Sante/ c-philippe-lachance-2009.pdf