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LES MYCOPLASMES Dr H. GONSU KAMGA Médecin biologiste FMSB / CHU Yaoundé OBJECTI

LES MYCOPLASMES Dr H. GONSU KAMGA Médecin biologiste FMSB / CHU Yaoundé OBJECTIFS OBJECTIF GENERAL Etablir le diagnostic biologique des mycoplasmes OBJECTIFS SPECIFIQUES • Identifier les mycoplasmes les plus rencontrés en pathologie humaine • Apprécier la pathogénicité des mycoplasmes • Maîtriser l’identification morphologique et biochimique des mycoplasmes PLAN INTRODUCTION I. PROPRIETES GENERALES II. HABITAT – POUVOIR PATHOGENE III. CIRCONSTANCES DIAGNOSTQUES IV. DIAGNOSTIC BIOLOGIQUE V. SENSIBILITE AUX ATB CONCLUSION INTRODUCTION Plus petites bactéries capables de réplication autonome Développement intra et extra-cellulaire Structure unique : absence de paroi Nombreux génomes séquencés Ubiquitaires : homme,animal,insectes,plantes INTRODUCTION  16 espèces chez l’homme : colonisation des muqueuses respiratoires et génitales - Présence à l’état commensal - Infections aigües ,maladies chroniques - Immunodéprimés:bactéries opportunistes Contaminants de cultures cellulaires I. PROPPRIETES GENERALES A. QUELQUES DATES 1898 Nocard et Roux:agent de la pleuropneumonie bovine(M.mycoides) 1937 Dienes et Edsall: pleuropneumoniae like organisms PPLO chez l’homme(M.hominis) 1954 Shepard : souche T(U.urealyticum) I. PROPRIETES GENERALES B. TAXONOMIE - Ordre des Procaryotes - Classe des Mollicutes - Mollicutes pathogènes pour l’homme - Ordre des Mycoplasmatales - Famille des Mycoplasmataceae - 2 genres: Mycoplasma et Ureaplasma I. PROPRIETES GENERALES C. MORPHOLOGIE - Pas de formes définies - Visible en fond noir ou contraste de phase: non colorable au Gram - Parfois mobiles(spiroplasme ou par glissement sur support solide) I. PROPRIETES GENERALES D. STRUCTURE  Absence de paroi (ni peptidoglycane,ni PLP) uniquement une membrane plasmique - caractère flexible et petite taille(passage à travers les filtres antibactériens de 0,45µm) - résistances aux antibiotiques agissant à ce niveau (bétalactamines)  Membrane cytoplasmique Riche en protéines 50 à 60% et en lipides 30 à 40% I. PROPRIETES E. CULTURE ET METABOLISME 1. Caractères culturaux ● Mycoplasmes cultivables en milieu acellulaire ; mais exigences nutritionnelles complexes en facteurs de croissance, en cholestérol: sérum,extrait de levure, tween 80… ● Aéro-anaérobies (certains anaérobies strictes) ● Croissance lente 18h - 2 à 3 mois ● Colonies en œuf sur le plat ou en tête d’épingle ● Inhibition de croissance et du métabolisme par Ac spécifiques I. PROPRIETES 2. Propriétés métaboliques ● Espèces fermentantes par fermentation du glucose: M.pneunoniae,M.genitalium ● Espèces non fermentantes par hydrolyse de L’arginine : M.hominis L’urée : Ureaplasma sp. ● Propriétés d’hémadsorption et d’hémolyse: M.pneumoniae II. HABITAT-POUVOIR PATHOGENE A. 16 ESPECES RETROUVEES CHEZ L’HOMME ● Le plus souvent extracellulaires ● Certaines commensales de l’oropharynx : PP certain de M.pneumoniae ● Certaines commensales des voies génitales PP certain mais occasionel de MH et de UU PP certain de M.genitalium HABITAT-PP B. MECANISMES DU PP 2 types: action directe action indirecte : mec.immunopathogène Adhérence Production de métabolites toxiques Pénétration intracellulaire Interaction avec le système immunitaire III. CIRCONSTANCES DE DIAGNOSTIC A. Infections du tractus respiratoire M.pneumoniae+++  Trachéobronchites  Pneumonies atypiques  Infections ORL(rares)  Formes asymptomatiques 20,formes graves III. CIRCONSTANCES DE DIAGNOSTIC B. INFECTIONS URO-GENITALES 1. Espèces rencontrées ●3 espèces pathogènes : Ureaplasma spp.,M.hominis,M.genitalium ● M.hominis et Ureaplasma spp.présents à l’état commensal - Colonisation variale avec: l’âge, l’état hormonal,la race, le niveau socio-économique, le nombre de partenaires - Plus fréquente chez l’homme que chez la femme Chez femme Mh < 10% , Uu >ou= 50% III. CIRC.DE DIAGNOSTIC B. INFECTIONS UROGENITALES (2) 1. Espèces rencontrées(2) ● Pb d’interprétation du pouvoir pathogène: seuil de pathogénicité(appréciation quantitative) ● M.genitalium non documenté chez le sujet sain (pousse très mal, dg uniquement moléculaire) 2. Infections chez l’homme Mg,U ● UNG ● Epidydimites, rares(U) prostatite III.CIRCONSTANCES DE Dg B. INFECTIONS UROGENITALES 3. Infections gynécologiques Mh,U,Mg Cervicite Mg Bartholinite Mh Vaginose bactérienne = déséquilibre de la flore bactérienne(X GV,anaérobies , Mh) Endométrites( Mh, U, Mg), salpyngite Mh,Mg) III. CIRCONSTANCES DE Dg B. INFECTIONS UG 4. Mycoplasmes et stérilité U • Retentissement qualitatif sur la mobilité des spermatozoïdes 5. Infections au cours de la grossesse Mh, U • Chorioamniotites • Fièvres post-partum, post-abortum III.CIRCONSTANCES DE Dg B. INFECTIONS UG 4. Mycoplasmes et stérilité U Retentissement qualitatif sur la mobilité des spermatozoïdes 5. Infections au cours de la grossesse Mh, U. - chorioamniotites - fièvres post-partum, post-abortum Mh+++ - avortements à répétition? Prématurité? hypotrophie? III.CIRCONSTANCES DE Dg C. INFECTIONS EXTRAGENITALES ET EXTRARESPIRATOIRES ● Souvent méconnues ● arthrites ● infections invasives chez ID Mp,Mh, U ● surinfections de plaies sternales Mh IV. Dg BIOLOGIQUE DES INFECTIONS A MYCOPLASMES A. INFECTIONS RESPIRATOIRES Mp 1. Dg direct  Prélèvements - Respiratoires (écouvillons gorge,aspiration nasopharyngées,LBA) - Exta-respiratoires (bulles cutanées…)  Conditions de prélèvement et de transport - écouvillons: éviter écouvillons en bois - Milieu de transport nécessaire : car bactéries fragiles - Si temps de stockage long ; congeler à -20°C IV. Dg BIOLOGIQUE A. INFECTIONS RESPIRATOIRES 1. Dg direct(2)  Recherche directe - Détection des antigènes: peu sensible ,peu spécfique - Recherche par PCR: cible gène de l’adhésine P1 IV.Dg BIOLOGIQUE A. INFECTIONS RESPIRATOIRES  Culture (idem MUG) Milieux de culture complexes - Base de peptone ou tryptone (protéine, aa) - Extrait de levure(vitamines et facteurs de croissance) - Substrat métabolique source d’énergie(glucose,arginine,urée) - Sérum (stérols et cholestérol) VI. Dg BIOLOGIQUE A. INFECTIONS RESPIRATOIRES Culture (2) - Milieux rendus sélectifs par ajout d’ATB(P,Amp) - Aucun milieu ne convient à toutes les espèces - Croissance +ou- lente en 02j à +++sem.; T° 30°c et 37°c - Atmosphère aérobie ou anaérobie enrichie en CO2. VI. Dg BIOLOGIQUE A. INFECTIONS PULMONAIRES Culture 3 - Milieux de culture liquides ou gélosés - Milieux liquides: avec indicateur coloré(rouge de phénol) ph adapté 7,4-7,6 Mycoplasmes; 6- 6,5Uréaplasmes - Milieux solides: sans substrat métabolique,ni rouge de phénol. Typage PCR-RFLP m.e.e de 2 types :1+2 VI. Dg BIOLOGIQUE A.INFECTIONS RESPIRATOIRES 2. Diagnostic sérologique  Ac non spécifiques: agglutinines froides  Ac spécifiques . FC . IFA . Agglutination de particules de latex . ELISA  Diagnostic de certitude: PCR + présence d’IgM VI. Dg BIOLOGIQUE B. INFECTIONS UROGENITALES  Ureaplasma spp.  M.hominis  M.Genitalium Uniquement un diagnostic direct Ureaplasma spp.et M.hominis - Culture sur milieux adaptés ou kits de Dg - Pas de sérologie - PCR rarement VI. Dg BIOLOGIQUE B. INFECTIONS UROGENITALES M.genitalium: Culture très fastidieuse Pas de sérologie Diagnostic par PCR VI. Dg BIOLOGIQUE B. INFECTIONS UROGENITALES 1. Prélèvements Prélèvements urogénitaux Chez m: écouvillonage urétral, urine 1er jet, sperme, sécrétions prostatiques Chez f: PCV,endomètre, trompe,liq.Douglas, liq.amniotique,placenta VI. Dg BIOLOGIQUE 1. Prélèvements(2) Nouveaux-nés Prélèvement nasopharyngé, gorge, endotrachéal Autres : en fonction du site de l’infection Liquide synovial, biopsie articulaire , sang, LCR… VI. Dg BIOLOGIQUE B. INFECTIONS UG 2. Culture: U.spp et M.h  Milieux cf M.p  Culture U.spp. M.h Milieu Shepard Hayflick Ph milieu 5,5 – 6 7,0 – 7,2 Temps 16 – 20h 24 – 48h Substrat urée arginine VI. Dg BIOLOGIQUE B. INFECTIONS UROGENITALES 2. Culture (2) Identification - Propriétés métaboliques en milieu liquide : Changement de couleur de l’indicateur de pH Ureaplasma spp. Jaune à orangé M.Hominis orangé à framboise VI. Dg BIOLOGIQUE B. INFECTIONS UROGENITALES 2. Culture(3)  Identification - Aspect des colonies sur gélose Ureaplama spp. Petites colonies ponctiformes noires (MnSO4) en 24h M.hominis : aspect en « œuf sur le plat »en 2 – 4j VI. Dg BIOLOGIQUE 2. Culture (4) Interprétation Prélèvements seuil - Pvts normalement stériles aucun isolement = infection - Homme Urètre et sperme U > 104 UCC /ml Urine 1er jet U > 103 UCC /ml VI. Dg BIOLOGIQUE B. INFECTIONS UROGENITALES 2. Culture (5) Interprétation - Femme Cervico-vaginal U aucun,non significatif Mh >104UCC / ml - NNé Endotrachéal U > 103UCC / ml VI. Dg BIOLOGIQUE B. INFECTIONS URO-GENITALES 2. Culture U et Mh  Kits commercialisés pour: - Identification - Numération - Sensibilité aux ATB bioMérieux, International Microbio, Bio-Rad, PBS Orgenics  Typage de Ureaplasma spp. 2 espèces ; 2biovars U.parvum plus fréq..que U.urealyticum V. SENSIBILITE AUX ATB A. METHODES D’ETUDE Pas de méthode standardisée Pas de diffusion en gélose 1. Diffusion en milieu liquide • CMI • Microméthode en plaque+++ • Kits commercialisés pour les mycoplasmes génitaux V. SENSIBILITE AUX ATB A. METHODE D’ETUDE Kits commercialisés - 2 rangées de puits à 2 concentrations d’ATB lyophilisés - Inoculum standardisé - Après une culture primaire 2. Dilution en milieu gélosé - CMI - Méthode classique sur milieu adapté CMI,CMB - Etest (M.hominis) : diffusion en gelose;pas possible pour U V. SENSIBILITE AUX ATB A. RESISTANCE INTRINSEQUE OU NATURELLE Commune à tous  Absence de paroi R.aux β lactamines,glycopeptides,fosfomycine  Sous-unité β de l’ARN polymérase R à la rifampicine  R. à : polymyxines,acide nalidixique , sulfamides V. SENSIBILITE AUX ATB B. RESISTANCE ACQUISE Pas de plasmide de Résistance décrit  Mutations chromosomiques ou transposons  Absence de systèmes de réparation de l’ADN: fréquence de mutation élevée TRAITEMENT DES INFECTIONS à M. A. Infections respiratoires - Macrolides et apparentés - Tétracyclines - Fluoroquinolones B. Infections génitales - Attention à l’ interprétation pour Mh et Uu - UNG doxycycline - Azythromycine V. TRAITEMENT C. Infections néonatales  Macrolides D. Infections extragénitales, chez l’immunodéprimé  Association de plusieurs ATB : CC +D +FQ  Traitement de l’immuno suppression CONCLUSION  Pb de standardisation des méthodes de diagnostic et d’étude à la sensibilité aux ATB  Résistances acquises peu connues et peu étudiées  Durée du traitement uploads/Sante/ mycoplasmes-dr-gonsu.pdf