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Étude du chimérisme après allogreffe de cellules hématopoïétiques : recommandat

Étude du chimérisme après allogreffe de cellules hématopoïétiques : recommandations de la Société francophone de greffe de moelle et de thérapie cellulaire (SFGM-TC) Valérie Dubois 1, Mehdi Alizadeh 2, Jean Henri Bourhis 3, Pascaline Etancelin 4, Olivier Farchi 5, Christophe Ferrand 6, Laure Goursaud 7, Isabelle Mollet 1, Virginie Renac 7, Pauline Varlet 5, Ibrahim Yakoub-Agha 8, Jacques-Olivier Bay 9 1. Laboratoire HLA, EFS Rhône Alpes, 1 et 3, rue du Vercors, 69007 Lyon, France 2. Laboratoire de recherche, EFS Bretagne, rue Pierre-Jean-Geneste, BP 1609, 35016 Rennes cedex, France 3. Institut Gustave-Roussy, service d'hématologie, 39, avenue Camille-Desmoulins, 94805 Villejuif cedex, France 4. Laboratoire génétique oncologique, centre H.-Becquerel, rue Edouard-Adam, 76000 Rouen, France 5. CHU de Lille, laboratoire HLA, boulevard Pr-Jules-Leclerc, 59037 Lille cedex, France 6. Laboratoire d'hématologie, ETS BFC, 1, boulevard Fleming, BP 1937, 25020 Besançon, France 7. Laboratoire HLA, EFS Bretagne, rue Pierre-Jean-Geneste, BP 1609, 35016 Rennes cedex, France 8. CHU de Lille, LIRIC Inserm U995, université de Lille 2, 59000 Lille, France. 9. CHU Clermont-Ferrand, site Estaing, service d'hématologie clinique adultes, 1, place Lucie-Aubrac, 63003 Clermont-Ferrand cedex 1, France Correspondance : Ibrahim Yakoub-Agha, Maladies du Sang, CHRU de Lille, 59037 Lille CEDEX, France sfgm-tc@orange.fr, Ibrahim.YAKOUBAGHA@CHRU-LILLE.FR Reçu le 11 avril 2017 Accepté le 10 août 2017 Disponible sur internet le : 8 novembre 2017 Mots clés Chimérisme PCR quantitative Maladie résiduelle Sang Résumé L'analyse du chimérisme est une étape importante pour le suivi de l'allogreffe de cellules souches hématopoïétiques. Elle permet de quantifier chez les patients allogreffés l'origine donneuse ou receveuse d'une population cellulaire obtenue à partir d'un prélèvement sanguin ou médullaire. En complément des résultats de l'hémogramme, cette technique est indispensable pour vérifier la qualité de la prise du greffon. L'objectif de cet article est ainsi de proposer des recommandations quant aux techniques utilisées, à l'analyse des résultats obtenus et aux décisions thérapeutiques potentielles dans le cadre des allogreffes de CSH réalisées pour des pathologies malignes et non malignes. tome 104S > n812S > décembre 2017 https://doi.org/10.1016/j.bulcan.2017.08.010 © 2017 Société Française du Cancer. Publié par Elsevier Masson SAS. Tous droits réservés. S59 Article original Bull Cancer 2017; 104S: S59–S64 en ligne sur / on line on www.em-consulte.com/revue/bulcan www.sciencedirect.com Introduction L'allogreffe de cellules souches hématopoïétiques (CSH) est devenue indispensable pour traiter certaines maladies héma- tologiques malignes, permettant des rémissions à long terme, voire la guérison. Les indications les plus fréquentes restent les leucémies aiguës et les syndromes myélodysplasiques. Concernant les hémopathies malignes, les objectifs de l'allo- greffe sont les suivants : remplacer l'hématopoïèse du receveur par celle d'un donneur, le greffon étant indemne de toute cellule tumorale ; induire chez le receveur une réponse allogénique antitumorale qui généralement s'exerce par l'intermédiaire des cellules immunocompétentes du greffon (lymphocytes T, cellules NK). Ceci conduit à une élimination optimale des cellules malignes résiduelles qui, dans certaines situations, peuvent être détec- tées, définissant ainsi la maladie résiduelle (MRD). Cette déter- mination est importante car sa positivité est prédictive d'une rechute. Avant la transfusion du greffon allogénique, il est nécessaire d'administrer un conditionnement. Apparu vers la fin des années 1990, des conditionnements dits non myéloablatifs ont été développés afin de diminuer la toxicité de l'allogreffe. Ces conditionnements non myéloablatifs sont associés à une reprise plus lente et progressive de l'hématopoïèse. L'évaluation du chimérisme est d'un intérêt tout particulier lorsque ce type de conditionnement est utilisé. Bien que les donneurs compatibles Human Leucocyte Antigen (HLA) 10/10 restent le standard de traitement, des greffes « alternatives » se sont plus récemment développées à partir de donneurs non apparentés avec incompatibilités HLA, de donneurs familiaux haplo-identiques ou encore de cordons ombilicaux. La détermination du chimérisme est également importante dans le cadre du suivi de ces patients. L'analyse du chimérisme permet de quantifier chez les patients allogreffés l'origine donneuse ou receveuse d'une population cellulaire obtenue à partir d'un prélèvement sanguin ou médul- laire. En complément des résultats de l'hémogramme, cette technique est indispensable pour vérifier la qualité de la prise du greffon. Par ailleurs, la présence de cellules tumorales du receveur peut être dans certaines situations déduites de la valeur du chimérisme. Toute réalisation d'une étude du chimérisme nécessite au pré- alable l'identification de marqueurs spécifiques du donneur et du receveur. Ces marqueurs permettront de quantifier le chimérisme. Outre la technique ou la méthode utilisée, le matériel cellulaire analysé et l'interprétation des résultats (chi- mérisme mixte ou non), il est nécessaire de définir la conduite thérapeutique devant découler d'une valeur donnée de chimérisme. L'objectif de cet article est ainsi de proposer des recommandations quant aux techniques utilisées, à l'analyse des résultats obtenus et aux décisions thérapeutiques potentielles. Un questionnaire a été envoyé à tous les centres greffeurs francophones, membres de la SFGM-TC. Le pourcentage de réponses obtenues a été de 60 % (23/38) : 14 centres greffeurs adultes, 4 centres greffeurs adultes ou pédiatriques et 5 centres greffeurs pédiatriques. Le suivi des patients greffés est consensuel pour les pathologies malignes associant chimérisme et MRD (87 %). La cinétique de suivi pendant la première année après greffe montre que des évaluations à j30, j90, j180 et j360 sont réalisées de façon quasi systématique (87 à 96 % selon le point considéré), majoritai- rement sur sang total. Les études sur moelle ou cellules triées sont plus occasionnelles. Les deux tiers des centres ayant répondu réalisent un suivi au moins annuel après la première année. Dans le cadre de la prise de greffe, un chimérisme est considéré comme « total donneur ou complet » lorsqu'il est strictement supérieur à 95 % donneur par 22/23 centres, parmi lesquels 41 % mettent le seuil à 98 % donneur. Dans les pathologies malignes, un chimérisme mixte associé à une MRD négative au cours des 6 premiers mois après greffe est recontrôlé. Si confirmation, la baisse du traitement immu- nosuppresseur est habituelle. Par contre, la corrélation chimé- risme mixte et MRD positive entraîne un arrêt le plus rapide possible de l'immunosuppression si elle est toujours en cours puis la réalisation d'injections de lymphocytes du donneur (DLI). Le chimérisme mixte est défini dans les réponses au question- naire selon les critères propres à chaque centre. Keywords Chimerism Real time PCR Minimal residual disease Blood Summary Chimerism analysis after hematopoietic cell transplantation: Guidelines from the Francophone Society of bone marrow transplantation and cellular therapy (SFGM-TC) Chimerism analysis is an important step for the patient follow-up after hematopoietic stem cell transplantation. It is used to quantify the donor and the recipient part of a cell population issued from blood or bone marrow sample. In addition to hemogram, this technique is necessary to appreciate the quality of engraftment. The aim of this article is to propose some recommendation about methods, result analysis and therapeutic decision in hematopoietic stem cell transplanta- tion for malignant or non-malignant diseases. V. Dubois, M. Alizadeh, J.H. Bourhis, P . Etancelin, O. Farchi, C. Ferrand, et al. tome 104S > n812S > décembre 2017 S60 Article original Méthodologie de préparation de l'atelier Cet atelier a été préparé et géré selon les recommandations établies par la Société francophone de greffe de moelle et de thérapie cellulaire (SFGM-TC) [1]. Un état des lieux a été réalisé à partir des réponses à un questionnaire provenant de 23 centres membres de la société. Une analyse de la bibliographie a été conduite par les membres du groupe. La revue de la littérature a été commentée et validée au cours de discussions clinicobiologiques pendant la durée de l'atelier. Une relecture des recommandations a été réalisée par des biologistes, des cliniciens greffeurs adultes et des cliniciens greffeurs pédiatres. Techniques d'analyse du chimérisme Plusieurs techniques de biologie moléculaire sont utilisables pour déterminer et quantifier le chimérisme (tableau I). Elles se distinguent par les marqueurs utilisés (microsatellites, poly- morphismes de type INDel), les méthodes et leur niveau de sensibilité : la technique Short Tandem Repeats (STR) est basée sur l'ana- lyse de régions répétées (micro-satellites) [2]. Elle est la méthode de référence pour l'identification des « traces » par la police scientifique. Les amorces utilisées pour l'ampli- fication sont situées sur des régions constantes, adjacentes des régions « polymorphes » dont le nombre de répétitions diffère. Cette différence dans le nombre de répétitions des STRs engendre une modification de la taille des produits de PCR pour chaque allèle. Le point fort de cette technique est représenté par la grande diversité des marqueurs, le nombre des allèles disponibles et la faible quantité d'ADN nécessaire par test. Ses points faibles sont l'analyse en deux étapes et la sensibilité modérée du test (3 à 5 % en fonction des laboratoires) ; une autre technique très utilisée est la PCR en temps réel (Q-PCR) [3]. Cette technique est basée sur l'analyse des poly- morphismes de type insertions/délétions (INDEL). La quanti- fication se fait en une seule étape dans une enceinte fermée. Les points forts de la technique sont représentés par l'absence de contamination, le temps de réalisation, le nombre de marqueurs utilisés et la sensibilité très élevée (0,05 %). Le point faible principal reste la quantité d'ADN nécessaire qui est plus importante que pour uploads/Sante/ tude-du-chimerisme-apres-allogreffe-de-csh.pdf