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1 2 TABLE DES MATIERES page INTRODUCTION --------------------------------------

1 2 TABLE DES MATIERES page INTRODUCTION -------------------------------------------------------------------------- 6 CHAPITRE 1 -------------------------------------------------------------------------------- 7 1. LA COAGULATION PLASMATIQUE------------------------------------------ 7 1.1 LES FACTEURS DE LA COAGULATION -----------------------------------------7 1.1.1 NOMENCLATURE---------------------------------------------------------------7 1.1.2 LIEU DE SYNTHESE ------------------------------------------------------------7 1.1.3 MODE D’ACTION ---------------------------------------------------------------8 1.2 LES ETAPES ------------------------------------------------------------------------ 10 1.2.1 FORMATION DE LA PROTHROMBINASE --------------------------------- 10 1.2.1.1 VOIE EXOGENE ( EXTRINSEQUE) ------------------------------------- 10 1.2.1.2 VOIE ENDOGENE (INTRINSEQUE)------------------------------------- 10 1.2.2 FORMATION DE LA THROMBINE ------------------------------------------ 10 1.2.3 FORMATION DE LA FIBRINE------------------------------------------------ 11 1.2.4 DEVENIR DU CAILLOT------------------------------------------------------- 13 1.3 LES TESTS D’EXPLORATION DE LA COAGULATION------------------------ 15 1.3.1 LES TESTS GLOBAUX-------------------------------------------------------- 15 1.3.1.1 LE TEMPS DE CEPHALINE-ACTIVATEUR :TCA--------------------- 16 1.3.1.2 LE TEMPS DE QUICK :TQ----------------------------------------------- 18 1.3.1.3 LE TEMPS DE THROMBINE :TT---------------------------------------- 18 1.3.2 LES TESTS ANALYTIQUES -------------------------------------------------- 18 1.4 INTERET PRATIQUE DE CES TESTS -------------------------------------------- 19 1.4.1 INTERET DIAGNOSTIC ------------------------------------------------------- 19 3 1.4.2 INTERET DANS LE SUIVI THERAPEUTIQUE------------------------------ 20 CHAPITRE 2 -------------------------------------------------------------------------------22 2. ESSAI COMPARATIF DU SCA 2000 -------------------------------------------22 2.1 PROTOCOLE EXPERIMENTAL--------------------------------------------------- 22 2.1.1 LES ANIMAUX----------------------------------------------------------------- 22 2.1.2 LES PRELEVEMENTS --------------------------------------------------------- 22 2.1.2.1 REALISATION------------------------------------------------------------- 22 2.1.2.2 CONSERVATION --------------------------------------------------------- 24 2.1.3 REALISATION DES TESTS AVEC LE SCA2000 ---------------------------- 24 2.1.3.1 MATERIEL----------------------------------------------------------------- 24 2.1.3.2 PRINCIPE DE FONCTIONNEMENT------------------------------------- 24 2.1.3.3 METHODE DE REALISATION ------------------------------------------ 25 2.1.4 REALISATION DU TEMPS DE QUICK PAR LA METHODE CHRONOMETRIQUE ---------------------------------------------------------------- 25 2.1.4.1 MATERIEL----------------------------------------------------------------- 25 2.1.4.2 METHODE ----------------------------------------------------------------- 26 2.1.5 REALISATION DU TEST DE CEPHALINE AVEC ACTIVATEUR PAR LA METHODE CHRONOMETRIQUE -------------------------------------------------- 26 2.1.5.1 MATERIEL----------------------------------------------------------------- 26 2.1.5.2 METHODE ----------------------------------------------------------------- 26 2.1.6 TRAITEMENT DES RESULTATS -------------------------------------------- 27 2.1.6.1 REPETABILITE------------------------------------------------------------ 27 2.1.6.1 REPRODUCTIBILITE ----------------------------------------------------- 27 2.2 RESULTATS OBTENUS ----------------------------------------------------------- 27 2.2.1 REPETABILITE ---------------------------------------------------------------- 27 2.2.2 REPRODUCTIBILITE---------------------------------------------------------- 28 4 2.2.3 COMPARAISON DES RESULTATS OBTENUS PAR LES DEUX METHODES -------------------------------------------------------------------------- 29 2.2.3.1 VALEURS OBTENUES CHEZ LES CHIENS SAINS-------------------- 29 2.2.3.2 RESULTATS POUR LE TEMPS DE QUICK----------------------------- 30 2.2.3.3 RESULTATS POUR LE TEMPS DE CEPHALINE-ACTIVATEUR----- 32 CHAPITRE 3 -------------------------------------------------------------------------------34 3. DISCUSSION---------------------------------------------------------------------------34 PRECISION DE LA METHODE-------------------------------------------------------- 34 POUR LE TEMPS DE QUICK ------------------------------------------------------- 34 Répétabilité : ------------------------------------------------------------------------ 34 Reproductibilité :-------------------------------------------------------------------- 35 POUR LE TEMPS DE CEPHALINE-ACTIVATEUR------------------------------- 35 Répétabilité : ------------------------------------------------------------------------ 35 Reproductibilité :-------------------------------------------------------------------- 35 COMMENTAIRE --------------------------------------------------------------------- 35 COMPARAISON DES RESULTATS--------------------------------------------------- 35 ASPECTS PRATIQUES ----------------------------------------------------------------- 37 CONCLUSION-----------------------------------------------------------------------------38 ANNEXES ----------------------------------------------------------------------------------39 BIBLIOGRAPHIE-------------------------------------------------------------------------44 5 TABLE DES ILLUSTRATIONS TABLEAUX Tableau 1 :Les facteurs de la coagulation plasmatique ([3][9][10]).....................................9 Tableau 2 : Modifications des tests au cours des principaux troubles de l’hémostase du chien et du chat ([8][11][17]) .........................................................................................21 Tableau 3 : affections rencontrées dans l’échantillon des chiens malades........................23 Tableau 4: Répétabilité pour le temps de Quick au SCA 2000 ..........................................27 Tableau 5: Répétabilité pour le temps de Céphaline-Activateur au SCA 2000................28 Tableau 6: Appréciation de la reproductibilité par calcul des coefficients de variation (CV)..................................................................................................................................28 Tableau 7: Valeurs pour les différents tests et par les deux types de méthodes pour les 31 chiens sains ......................................................................................................................30 Tableau 8 : Répartition des résultats obtenus pour le temps de Quick pour les 68 chiens malades............................................................................................................................30 Tableau 9 : Répartition des résultats obtenus pour le TCA pour les 68 chiens malades 32 GRAPHIQUES Graphique 1: Corrélation entre les mesures de temps de Quick effectuées par la méthode chronométrique et avec le SCA2000 pour l’échantillon des chiens malades (on a utilisé les Log pour éparpiller la distribution). ..................................................31 Graphique 2: Corrélation entre les mesure de temps de Céphaline-Activateur réalisées par la méthode chronométrique et avec le SCA 2000 pour l’échantillon des chiens malades (on a utilisé les Log pour éparpiller la distribution). ...................................33 ANNEXES Annexe 1 : Temps obtenus pour l’échantillon des chiens sains (en secondes)..................40 Annexe 2 : Temps obtenus pour l’échantillon des chiens malades (en secondes).............42 Annexe 3 : mode d’emploi du SCA 2000..............................................................................43 6 INTRODUCTION L’hémostase est un état d’équilibre relativement instable qui peut être maintenu grâce à trois mécanismes successifs : l’hémostase primaire qui aboutit à la formation du clou plaquettaire, la coagulation plasmatique dont résulte la formation du caillot et la fibrinolyse qui permettra à terme la solubilisation de ce caillot. Une perturbation de l’une de ces étapes aura pour conséquence un déplacement de l’équilibre dans le sens d’un syndrome hémorragique ou d’un syndrome thrombotique. Et si ces anomalies peuvent être suspectées cliniquement, leur diagnostic proprement dit passe par des examens complémentaires plus ou moins complexes et donc plus ou moins accessibles au praticien, car difficiles à standardiser et à interpréter. Ainsi la coagulation plasmatique nécessite pour son évaluation de base: ü Le temps de céphaline avec activateur (T.C.A.) qui explore la voie endogène et la voie commune de la coagulation plasmatique ü Le temps de Quick (T.Q.) qui explore la voie exogène et la voie commune de la coagulation plasmatique ü Le temps de thrombine (T.T.) qui explore la fibrinoformation, dernière étape de la coagulation plasmatique. Ces examens nécessitent, outre une certaine habitude de leur réalisation, de comparer l’échantillon testé à un échantillon témoin, ce qui rend leur réalisation plus lourde encore. Le laboratoire SYNBIOTICS propose en commercialisant le SCA2000 une méthode d’obtention du T.C.A. et du T.Q. qui est rapide, automatisée, réalisable à partir d’un simple échantillon de sang total et ne requerrant pas de comparaison à un échantillon témoin. L’objet de ce travail et d’apprécier, en la comparant aux méthodes chronométriques classiquement employées, la fiabilité de cette méthode chez le chien. Après un bref rappel des mécanismes mis en jeu lors de la coagulation plasmatique, nous décrirons les techniques employées, les méthodes utilisées pour les comparer et les résultats obtenus. Enfin, nous évaluerons l’intérêt de ces méthodes, leurs limites et leur applicabilité en pratique courante. 7 CHAPITRE 1 1. LA COAGULATION PLASMATIQUE L’hémostase est un état d’équilibre complexe qui découle de trois grands mécanismes. Le 1er d’entre eux est l’hémostase primaire qui aboutit à la formation d’un clou plaquettaire. La coagulation plasmatique intervient ensuite pour renforcer ce clou plaquettaire grâce à la synthèse d’un caillot de fibrine ( celui ci sera par la suite remanié au cours de la 3 ème étape de l’hémostase que constitue la fibrinolyse). Elle fait intervenir de nombreux facteurs qui vont interagir au cours d’étapes réactionnelles successives. 1.1 LES FACTEURS DE LA COAGULATION ([3][9][10]) Cf. tableau 1 1.1.1 NOMENCLATURE Ces facteurs sont pour la plupart des glycoprotéines plasmatiques. Ils sont désignés par des chiffres romains suivi ou non d’un « a » indiquant leur état activé ou pas. Ils sont au nombre de douze ( I,II,III,IV,V,VII,VIII,IX,X,XI,XII,XIII) auxquels il faut ajouter deux facteurs découverts plus récemment : le kininogène de haut poids moléculaire (KHPM) et la prékallicréine ( préK). 1.1.2 LIEU DE SYNTHESE ( [21]) La plupart de ces facteurs ont une synthèse hépatique ( facteurs I,II,V,VII, VIIIc ?, IX, X, XI, XII, XIII) , ce qui explique que des troubles de la coagulation peuvent faire partie des anomalies biologiques rencontrées lors d’une affection hépatique. Les facteurs II, VII, IX et X sont dits « vitamine K dépendants » car leur synthèse est tributaire de la présence de vitamine K. Celle-ci permet en effet la fixation d’un groupement carboxyl dans la chaîne polypeptidique de ces facteurs, ce groupement conférant aux facteurs en question la capacité de se lier au calcium et aux phospholipides. Un déficit en vitamine K (classiquement rencontré en cas d’intoxication par certains anticoagulants) se traduira donc par la synthèse de facteurs inactifs et donc par des troubles de la coagulation. 8 1.1.3 MODE D’ACTION Les facteurs II, VII, IX, X, XI, XII et XIII sont des zymogènes qui acquièrent leur fonctionnalité après activation par protéolyse ( ce sont le plus souvent des sérine-protéases). Les facteurs V et VIII sont eux des cofacteurs enzymatiques, véritables catalyseurs de la coagulation plasmatique. Ils n’ont en effet pas d’activité enzymatique propre mais participent, avec le Ca²+ et les phospholipides, à la formation des complexes activateurs ténase et prothrombinase. N.B. : le facteur VIII est en réalité la combinaison de deux protéines reliées par des liaisons non covalentes : le facteur VIII coagulant ( VIIIc) et le facteur de Von Willebrand (FVW). 9 Tableau 1 :Les facteurs de la coagulation plasmatique ([3][9][10]) N° Dénomination Forme active Lieu de synthèse consommation Demi- vie Rôle I fibrinogène fibrine foie oui 2-4 jours Monomère protéique se polymérisant pour donner la fibrine II prothrombine thrombine foie avec vitamine K oui 3-4 jours Hydrolyse le fibrinogène. Active les facteurs II,V,VII,VIII,XI & XIII III thromboplastine tissulaire absente tissus --- --- Active le facteur X dans le complexe prothrombinase IV ion calcium Ca²+ --- --- --- Nécessaire à la plupart des étapes de la coagulation V proaccélérine Va foie et SMM oui 36-48 heures Cofacteur du X dans le complexe prothrombinase VII proconvertine VII et VIIa foie avec vitamine K non 4 heures VIIa et facteur tissulaire activent le X VIIIc facteur anti- hémophilique A VIIIa foie? Cellules endothéliales oui 10-16 heures Cofacteur du IX dans le complexe antihémophilique, constitue avec les phospholipides, le Ca²+ et le IXa le complexe ténase permettant l'activation du X IX facteur anti- hémophilique B IXa foie avec vitamine K non 24 heures Entre dans la composition du complexe ténase permettant l'activation du X par voie endogène X facteur Stuart Xa foie avec vitamine K non 36-48 heures Donne le Xa faisant partie du complexe prothrombinase et active les facteurs VII et IX XI facteur PTA XIa uploads/Sante/ hematologia-coagulation-chez-le-chien.pdf