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Examen bactériologique du sang: HEMOCULTURE Présentation de bactériologie: Rédi

Examen bactériologique du sang: HEMOCULTURE Présentation de bactériologie: Rédigé et présenté par: NGUIAKAM SIPOWE Aguy Clémence Sous la supervision de: Mr ASSIENE Serge PLAN Introduction I. Objectifs II. Principe III. Ce qu’il faut savoir avant toute hémoculture IV. Indications de l’hémoculture V. Critères de gravités des symptômes VI. Bactériémie/ septicémie VII. Analyse bactériologique conclusion INTRODUCTION Le corps de l’homme est un système complexe constitué de cellules, de tissus, d’organes et de divers liquides biologiques. Certains de ces liquides réputés stériles permettent de mettre en évidence une éventuelle modification de leur physiologie (présence anormale d’agents pathogènes/ bactéries, virus, champignons,…) INTRODUCTION 2 C’est le cas du sang, qui est normalement stérile, mais qui se voit infecté par des pathogènes aussi bien spécifiques qu’opportunistes. En ce qui nous concerne, nous devons mettre en évidence les symptômes observables, le prélèvement utilisé ainsi que le traitement adapté, dans le diagnostique d’une infection prolongée dans le sang(bactériémie/septicémie). OBJECTIFS Spécifiques • Identification de germes • Poser ou confirmer un diagnostic • Réaliser un antibiogramme OBJECTIFS 2 Autres • Rechercher et préciser l’étiologie d’une endocardite infectieuse • Orienter la recherche d’un foyer infectieux indéterminé • Documenter l’implication d’un dispositif intra vasculaire dans un état septique PRINCIPE Mise en évidence des germes présents dans le sang, par mise en culture dans des milieux de culture spécifiques (milieux ordinaire, enrichi, sélectif…), en vue d’obtenir des colonies isolées pures pour une meilleure identification des espèces, une antibiothérapie adaptée et une meilleure prise en charge. CE QU’IL FAUT SAVOIR Le sang étant normalement stérile, lorsque des agents infectieux y passent, de façon répétée, ils peuvent provoquer une infection grave (bactériémie, voire septicémie). L’hémoculture est un examen bactériologique Les germes (microbes)recherchés sont aérobies et/ou anaérobies dans le sang. CE QU’IL FAUT SAVOIR 2 Leur mise en évidence se fait par culture dans des milieux propice à leur multiplication et croissance(bouillon d’hémoculture) Il est effectué si possible avant la mise en route d'une antibiothérapie. Hémoculture : c’est la culture du sang CE QU’IL FAUT SAVOIR 3 Bactériémie :c’est la présence brève et transitoire de bactéries viables circulant dans le sang. La fièvre et les frissons sont les manifestations aiguës communes de la bactériémie. Septicémie : décharge prolongé de bactéries viables, en grande quantité dans le sang, accompagné d’un syndrome infectieux. CE QU’IL FAUT SAVOIR 4 Cas particuliers nécessaire à signaler, la recherche: de listériose, des mycobactéries, des bactéries à croissance lente ou difficile (Brucella, Campylobacter, Légionnella, Mycoplasme Ureaplasma, Leptospira, Groupe HACEK, Streptocoques déficients, Bartonella), CE QU’IL FAUT SAVOIR 5 Cas particuliers nécessaire à signaler, la recherche: des levures et moisissures ... milieux de culture spécifique (Bactec, Isolator, Bact alert) Dans la plupart des cas, l’hémoculture est plus fréquemment positive en début de maladie qu’a la fin. CE QU’IL FAUT SAVOIR Il existe deux principales méthode de traitement de l’hémoculture: Le système manuel Le système automatisé Indications de l’hémoculture L’hémoculture peut être demandée dans plusieurs situations, notamment : En cas de suspicion de septicémie (symptômes de sepsis sévère ou un choc septique) En cas de fièvre prolongée et inexpliquée Hypothermie En cas de complications d’un abcès, d’un furoncle ou d’une infection dentaire importante Indications de l’hémoculture 2 L’hémoculture peut être demandée dans plusieurs situations, notamment : en cas de fièvre survenant chez une personne porteuse de matériels étrangers (un cathéter, d’une sonde, un pace maker ou d’une prothèse…) Surveillance des patients à risque(Agés, immunodéprimés, …) Drogués par voie IV Critères de gravité des syndromes DIAGNOSTIQUE D’UNE BACTÉRIÉMIE BACTÉRIÉMIE/ SEPTICÉMIE Définitions – infection: phénomène microbien caractérisé par une réponse inflammatoire due a la présence de microorganismes – SRIS: réponse inflammatoire due a diverses agressions – Sepsis: SRIS associé a une défaillance organique( acidose métab, hypoxémie, …) et a une infection BACTÉRIÉMIE/ SEPTICÉMIE 2 – Sepsis sévère: sepsis + défaillance viscérale et troubles de la perfusion (HypoTA non réfractaire au remplissage) – Choc septique: conséquence d’une septicémie; sepsis sévère + HypoTA persistante. ÉPIDÉMIOLOGIE ET PORTE D’ENTRÉE PHYSIOPATHOLOGIE(SEPTICÉMIE) 3 mécanismes en causes: Mécanisme général Mécanismes septiques Autre schéma PHYSIOPATHOLOGIE(SEPTICÉMIE) 1. Mécanisme général Décharge bactériennes à partir d’un foyer infectieux Diffusion hématogène Foyer métastasique Etat septique PHYSIOPATHOLOGIE(SEPTICÉMIE) Libération de métabolites( LPS, Peptidoglycane) Réponse inflammatoire humorale et cellulaire Activation de la coagulation(CIVD) 2. Mécanismes septiques: Thrombophlébites septique Septicémies a point de départ lymphatique Endocardites infectieuses PHYSIOPATHOLOGIE(SEPTICÉMIE) Septicémies a point de départ lymphatique Porte d’entrée digestive Mécanisme: TD( multiplication) ganglions(multiplication) Lymphe sang Diffusion sanguine lente et progressive, aigue Germes: salmonella; brucella PHYSIOPATHOLOGIE(SEPTICÉMIE) Décharge bactérienne continue, fièvre continue, sans frissons, faible densité microbienne PHYSIOPATHOLOGIE(SEPTICÉMIE) 3. autres schémas Infections nosocomiales: • Septicémie post-chirurgicale • Complication d’une infection localisée • Point de départ exogène chez les immunodéprimés ANALYSE BACTERIOLOGIQUE Une analyse bactériologique a 3 principales phases: Examen bactériologique Phase post- analytique Phase pré- analytique Phase analytique ANALYSE BACTERIOLOGIQUE A. La phase pré-analytique 1. Accueil et enregistrement du patient 2. Prélèvement 3. Conservation et transport ACCUEIL ET ENREGISTREMENT DU PATIENT Ici on relève: le nom et le prénom du patient, son âge, son sexe, son numéro de téléphone, la nature de l’examen demandé, le numéro du reçu … PRÉLÈVEMENT 1. Matériels 2. Conditions de prélèvement 3. Protocole de prélèvement 4. Condition d’acceptation du prélèvement 5. Conservation et transport MATÉRIELS Flacons standard aérobie et anaérobie Dispositif de prélèvement( épicrânien, aiguille ou seringue) Corps de pompe, garrot, container OPCT Gants de soin Compresse stérile, eau stérile MATÉRIELS Savon Bétadine scrub ou hibiscrub si allergie à l’iode Bétadine alcoolique ou Chlorhexidine alcoolique EPI,SHA MATÉRIELS CONDITIONS DE PRÉLÈVEMENT ☻Où prélever? CONDITIONS DE PRÉLÈVEMENT 2 via un DIV: Présence fréquente de contaminants Intérêt = responsabilité du DIV dans une bactériémie hémocultures appariées ou quantitatives ☻Quand prélever? • Pic fébrile:≥ 39,5°c; < 36,5°c • frissons, sueurs • à tout moment lorsque la fièvre est continue CONDITIONS DE PRÉLÈVEMENT 3 ☻indications? • Asepsie rigoureuse impérative • Avant toute antibiothérapie ou fenêtre thérapeutique(24-48h) ☻Ordre de prélèvements • Flacon aérobie • Puis anaérobie CONDITIONS DE PRÉLÈVEMENT 4 ☻Quel volume ? La concentration de bactéries dans le sang est très faible chez l’adulte(1UFC/ml),d’où l’importance du respect de la quantité à prélever. Il faut prélever une quantité suffisante de sang (environ 20 ml par échantillon pour l’adulte et 2-6ml pour l’enfant). CONDITIONS DE PRÉLÈVEMENT 5 ☻Combien de flacons? Min: 2 flacons ;tendance actuelle 1seul conditionné pour les 2 atmosphères Conseiller: 4-6 flacons à 1h d’intervalles au min. CONDITIONS DE PRÉLÈVEMENT 6 Systèmes de prélèvements: ☻Prélèvements multiples, moins conseillé ☻Risque de contamination très élevée ☻Inconfortable et douloureux pour le malade ☻Cout élevé ☻Perte de temps ☻Difficulté dans le diagnostique des infections CONDITIONS DE PRÉLÈVEMENT 7 Systèmes de prélèvements: ☻Prélèvements uniques(épicrânien), très conseillé ☻Confort du malade ☻ le risque de contamination ☻Gain de temps ☻Cout réduis ☻ la sensibilité de détection PRÉLÈVEMENTS (PROTOCOLE) 1. Préparation du patient - A jeun non nécessaire. - Prévenir le patient. 2. Préparation du matériel - Plateau ou haricot. Lavage aseptique des mains ou friction hydro- alcoolique nécessaire. Apprêter le matériel. PRÉLÈVEMENTS (PROTOCOLE) 2 1. Choisir le site de ponction(pli du coude) et Repérer la veine 2. Asepsie rigoureuse des mains et port des gants(SHA) 3. Poser le garrot PRÉLÈVEMENTS (PROTOCOLE) 3 4. Désinfecter l’opercule en caoutchouc des flacons. 5. antisepsie de la zone de ponction l'aide d'un antiseptique alcoolique. 6. Ponction directe de la veine en respectant le volume indiqué PRÉLÈVEMENTS (PROTOCOLE) 4 7. Défaire le garrot et retirer la seringue 8. Pansement de la zone de ponction 9. Inoculer les flacons: aérobie et anaérobie 10. Identifier et horodater les flacons 11. Eliminé le kit de prélèvement dans le container OPCT 12. Ranger le matériel PRÉLÈVEMENTS (PROTOCOLE) 5 13. Acheminement rapide au laboratoire dans les 4 heures suivant le prélèvement à température ambiante NB: Si des tubes pour d’autres examens doivent être prélevés, prélever d’abord les hémocultures. Attention une quantité trop faible ou trop importante de sang fausse le résultat Conditions d’acceptation de l’hémoculture o Chez l’adulte Volume suffisant, Ratio sang/bouillon:1/5 à 1/10 (vol/vol) Délai d’acheminement au laboratoire ≤ 4h à température ambiante Conditions d’acceptation de l’hémoculture 2 o Chez l’enfant Conditions d’acceptation de l’hémoculture 3 • Chaque flacon pédiatrique doit contenir au max 4ml, un seul flacon bien rempli vaut mieux que plusieurs mal remplis. • Délai d’acheminement ≤ 4h ANALYSE BACTERIOLOGIQUE B. La phase analytique 1. Macroscopie 2. Microscopie 3. Ensemencement 4. Identification et antibiogramme Macroscopie Inspection des flacons chaque jour ou mieux deux fois par jour: recherche des signes témoignant d'une croissance visible. Avec une certaine habitude il est possible en fonction de l'aspect d'un flacon de pressentir l'identité de la bactérie en cause. Macroscopie 2 les Neisseria, les Haemophilus et les Campylobacter troublent peu ou pas le bouillon de culture et que l'usage d'un flacon diphasique s'avère utile pour ces espèces. MICROSCOPIE Etat coloré(Gram) Il est fait à partir du bouillon d’hémoculture pour identifier la nature et le type de bactéries : • Bacilles ou coques • Gram positif ou négatif MICROSCOPIE 2 Etat coloré(Gram) Il est fait à partir du bouillon d’hémoculture pour identifier la nature et le type de bactéries : • Bacilles ou coques • Gram positif ou négatif Culture Il est fait au lit uploads/Sante/examen-bacteriologique-du-sang1.pdf